طراحی و ساخت سیستم تظاهر ژن پروتئین انتقال دهنده چربی (ltp2) در لوبیا

پروتئین های انتقال دهنده ی لیپید با نام اختصاری ltp، پپتید های کوچک و غنی از سیستئین و کاتیونی می باشند. این پروتئین ها در حدود 10-7 کیلو دالتون وزن دارند و براساس وزن مولکولی به دو گروه ltp1 و ltp2 تقسیم می شوند که وزن مولکولی آن ها به ترتیب 9 و 7 کیلو دالتون می باشد. این پروتئین ها دارای فعالیت بیولوژیکی مختلف می باشند و همچنین تأثیر خاصی در مکانیسم دفاعی گیاهان دارند. در این مطالعه با بررسی کتابخانه های est، مشخص گردید که ژن هایltp در تنش با بیماری فوزاریومی و همچنین در طی تنش خشکی در گیاه گندم افزایش بیان نشان می دهند. با بررسی کتابخانه های میکرواری آلودگی فوزاریوم و زنگ در گندم و جو افزایش بیان ژن های ltp در رقم های مقاوم در مقایسه با رقم های حساس با افزایش زمان پس از آلودگی مشخص گردید. بنابراین می توان نتیجه گرفت که بیان بالای این ژن در افزایش تحمل این گیاهان در برابر تنش ها موثر است. همچنین در این مطالعه ژن ltp2 گندم فلات جهت بیان در سیستم گیاهی کلون گردید و بعد از انتقال موقت به گیاه، اثرات ضد میکروبی پروتئین نو ترکیب مورد مطالعه قرار گرفت. ltp2 گندم، رقم فلات دارای 121 اسیدآمینه است که ساختار سه بعدی آن از 4 هلیکس آلفا تشکیل شده و دومین پروتئینی آن از اسیدآمینه 30 آغاز و تا اسیدآمینه 117 ادامه می یابد. برای ساخت سیستم تظاهر ژن ltp2، ژن ltp2 موجود در پلاسمید pjet1.2 تکثیر و جداسازی گردید. سپس ژن ltp2 و پلاسمید pbisn1-in با آنزیم برشیhindiii برش خورده و لایگیشن انجام شد. سپس پلاسمید نوترکیب در باکتری e.coli سویه dh5? کلون گردید. برای بررسی کارایی سیستم بیانی ساخته شده ابتدا پلاسمید نوترکیب استخراج و به اگروباکتریوم سویه lba4404 منتقل و سپس با استفاده از روش اگرواینفیلتریشن به گیاه لوبیا انتقال داده شد. بیان این سیستم در سطح rna بررسی گردید و همچنین با بررسی میزان پروتئین فعال و محلول در برگ تزریق شده با پلاسمید نوترکیب بیان و عملکرد پروتئین تأیید شد. بررسی اثر پروتئین شیمری حاصل بر باکتری staphylococcus aureus خاصیت ضد میکروبی این پروتئین را نشان داد.